BL21（AI）感受态细胞

BL21(AI)感受态细胞

产品规格CAT#: BFNC86069-01(10×100ul)/BFNC86069-02(50×100ul)

BL21(AI)：                                                   100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                    10μl

保存条件(保质期)：                             -80℃（6个月）

基因型

F^- ompT hsdS_B(r_B^-m_B^-) gal dcm araB::T7RNAP-tetA

产品说明

BL21(AI)是大肠杆菌B/r型菌株(E.coli B/r)。BL21(AI) 来源于BL21菌株，为Lon蛋白酶和膜外蛋白酶OMPT的缺陷型菌株，这两种酶的缺失有效防止异源蛋白在大肠杆菌体内的降解。在培养基中添加L-阿拉伯糖可诱导araBAD启动子下游T7RNA聚合酶的表达进而促进目的蛋白的表达。在培养基中添加葡萄糖可抑制araBAD启动子下游T7RNA聚合酶的表达进而抑制目的蛋白的表达。BL21(AI) 感受态细胞适用于任何以T7启动子为基础的表达载体，能够进行高水平的重组蛋白表达。因为菌株能够对体内的T7 RNA聚合酶水平进行高效调节，BL21(AI) 感受态细胞能够表达对其他BL21细胞有毒性或抑制生长的蛋白。普通重组蛋白在BL21(AI) 菌株中获得产量和其他BL21菌株产量相当；对大部分毒性蛋白，在BL21(AI) 菌株中获得的产量高于BL21(DE3)pLysS菌株或BL21(DE3)菌株。

青旗生物生产的BL21(AI) 感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率高达10⁸cfu/μg DNA。

BL21(AI)感受态细胞

操作方法

1.  BL21(AI)感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手bo打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基（2YT或LB），混匀后37℃，200rpm复苏60分钟。

4. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含抗生素的2YT 或LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

注意：

1. Brian Caliendo (Voigt 实验室)报道过pCP20质粒比较难于转化到这个感受态细胞中，而pCP20转化到其他菌株中都很正常，但是菌体原因未知。

2. 不加葡萄糖，BL21(AI) 细胞的araBAD启动子下游的本底蛋白表达水平仍然很低，加入葡萄糖后能够进一步的降低本底蛋白的表达水平。

IPTG

Prepare a 1 M solution of IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside / thiogalactopyranoside) by dissolving 2.38 g of IPTG in dd water and adjust the final volume to 10 ml. Filter sterilize before use.

注意事项

1. 感受态细胞尽量在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。

2. 混入质粒时应轻柔操作。

3. 转化高浓度的质粒可相应减少终用于涂板的菌量。

4. 诱导时，IPTG浓度可选（0.1-2mM均可）。

5. 为获得需要量的蛋白，诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。

建议选择该菌株进行蛋白表达的条件如下：

1. 使用T7启动子载体（高拷贝或者低拷贝都可以）进行蛋白表达。

2. 使用其他BL21菌株进行蛋白表达时，观察到明显的细菌生长的抑制作用。

3. 表达一个已知的毒性蛋白。