PEG/LiAc配套试剂

PEG/LiAc配套试剂

● 产品规格

● 产品说明

 PEG是一种高分子聚合物，只有分子量达到3000左右的PEG才会发挥大的转化促进作用。

酵母感受态细胞转化所需PEG分子量为4000，可促进酵母转化效率达到10³-10⁵ cfu/μgDNA。PEG在酵母转化中起到在高浓度LiAc环境中保护细胞膜，减少LiAc对细胞膜结构损伤的作用；同时PEG可促使质粒更紧密贴附酵母细胞壁。LiAc可使酵母细胞产生一种短暂的感受性状态，此时酵母能够摄取外源性DNA。

PEG/LiAc配套试剂是青旗生物生产的酵母感受态细胞转化所必需的配套试剂，每个转化反应需要500 µl PEG/LiAc。

● 操作方法

1. Carrier DNA 在每次使用前要通过加热处理使其变性为单链状态，步骤如下：Carrier DNA 放95℃水浴或金属浴3 min，快速插入冰中，静置3 min，再次放95℃水浴或金属浴3 min，快速插入冰中，静置3 min以上。

2. 取100 µl冰上融化的酵母感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒2-5 µg，Carrier DNA 10 µl，PEG/LiAc 500 µl并吸打几次混匀，30℃水浴30 min (15 min时翻转6-8次混匀)。

3. 将管放42℃水浴15 min (7.5 min时翻转6-8次混匀)。

4. 5000 rpm离心 40 s弃上清，ddH₂O 400 µl 重悬，离心 30s弃上清。

5. ddH₂O 50 µl重悬，涂板，29℃培养48-96 h。

● 注意事项

1. PEG长时间静置易沉淀，在每次使用前务必摇晃，使试剂中各组分分布均匀。

2. PEG/LiAC 可在4℃长时间保存。